如何構建一個基因的過表達載體
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1、首先要用一定的限制酶切割質粒,使質粒出現一個缺口,露出黏性末端。
2、用同一種限制酶切斷目的基因,使其產生相同的黏性末端。
3、將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處,首先鹼基互補配對結合,兩個黏性末端吻合在一起,鹼基之間形成氫鍵。
4、再加入適量DNA連線酶,催化兩條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵,從而將相鄰的脫氧核糖核酸連線起來,形成一個重組DNA分子。如人的胰島素基因就是通過這種方法與大腸桿菌中的質粒DNA分子結合,形成重組DNA分子。
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