基因表達載體構建步驟
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操作步驟如下:
1、用一定的限制酶切割質粒,使質粒出現缺口,露出黏性末端;
2、再用同一種限制酶切斷目的基因,使其產生相同的黏性末端;
3、將切下的目的基因的片段插入質粒的切口處;
4、再使鹼基互補配對結合,兩個黏性末端吻合在一起,鹼基之間形成氫鍵;
5、再加入適量的DNA連接酶,催化兩條DNA鏈之間形成磷酸二酯鍵,從而將相鄰的脱氧核糖核酸連接起來,形成一個重組DNA分子。
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